发酵后处理:发酵液菌体收集的常用方法(离心沉淀法、滤液法和超滤法)

来源:世展网 分类:生物行业资讯 2023-07-20 13:39 阅读:18644
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发酵液菌体收集的常用方法包括离心沉淀法滤液法超滤法。每种方法都有其优缺点,下面分别介绍:

1. 离心沉淀法将发酵液经过高速离心,使菌体沉淀到离心管底部,然后将上清液倒掉,最后收集菌体沉淀。这种方法操作简单,适用于较大颗粒的菌体。然而,离心沉淀法收集的菌体含有较高的液相杂质,并且可能造成细胞破裂和损伤。离心机是一种广泛应用于实验室和工业生产中的设备,根据其结构、用途和操作原理的不同,可以分为以下几类:①.超速离心机:超速离心机是最常见的离心机类型。它具有高速旋转的离心转子,通常用于分离微量物质,如细胞、蛋白质以及核酸等。超速离心机通常具有高速度和高离心力,可以分离出微小的颗粒和物质。.桌面离心机:桌面离心机是小型离心机,适用于实验室和小规模实验操作。它通常具有较低的容量和转速,用于离心小样本和试管。桌面离心机常用于生化实验、分子生物学以及临床检验等领域。.中速离心机:中速离心机通常具有较大容量和较低的转速。它常用于分离较大体积的液体和颗粒,例如工业生产中的悬浮液的分离、血液离心分离等。④.低速离心机:低速离心机的转速通常较低,适用于对样品要求较为温和的离心操作,例如对柔软的细胞、培养基中的细菌、细胞培养物的分离。⑤.通用离心机:通用离心机通常具有多种功能和多组离心转子,可以适应不同容量、规格和离心要求的样品分离。此外,还有一些特殊类型的离心机,如差速离心机、分子离心机、气密离心机等,这些离心机通常具有特定的应用领域和特殊的分离效果。选择合适的离心机需要考虑样品性质、分离要求、容量和操作易用性等因素。

2.滤液法使用滤纸、滤膜等滤器将发酵液过滤,将菌体滞留在滤膜上。这种方法能够有效收集细小的菌体,产出的菌体较为纯净。然而,滤液法需要使用较高的压力或真空力来推动液体通过滤膜,且滤膜可能会因为菌体的黏附而堵塞,影响过滤效果。

以下是滤液法收集菌体的一般步骤:

①.准备滤液装置:选择合适的滤液装置,通常包括过滤漏斗或真空滤液装置、滤膜和收集容器。确保滤膜和收集容器是干净和无菌的。

.预处理发酵液:根据实际需要,对发酵液进行必要的预处理。例如,可以通过离心等操作去除颗粒物或固体杂质,使液体较为清澈,以利于后续的滤液操作。

③.装配滤液装置:将滤膜放置在过滤漏斗或真空滤液装置上,确保滤膜安装牢固且没有气泡或漏洞。将装置放置在收集容器上,以便接收滤过液。

.进行滤液操作:将预处理后的发酵液缓慢倒入过滤装置中,或使用真空装置建立负压吸引液体通过滤膜。滤液操作需要小心缓慢,以防滤膜破裂或菌体泄漏。.收集菌体:一旦发酵液通过滤膜,菌体将滞留在滤膜上。当滤液操作完成后,将滤膜上的菌体收集到干净的容器中。可以用适当的缓冲液洗涤滤膜的表面,以确保尽可能多的菌体被收集到。.处理收集的菌体:收集到的菌体可根据需要进行进一步的处理,例如冻干、冷冻保存或进行细胞破碎提取。滤液法可用于收集各种细菌、酵母菌等微生物菌体,由于操作简单、适用性广泛,常应用于实验室和工业中的菌体收集和分离过程。 3.超滤法

利用超滤膜的筛选作用,将发酵液通过超滤膜,使较大的菌体和颗粒滞留在膜上,将小分子溶质和液相通过膜洗脱。超滤法能够有效分离菌体和溶液,收集较为纯净的菌体。但超滤法需要使用专用设备,且操作相对较为复杂和费时。综合来看,离心沉淀法操作简单但收集的菌体纯度较低,滤液法适用于收集小颗粒菌体但可能会受滤膜堵塞的影响,超滤法能够得到纯度较高的菌体但需要专用设备。选择合适的方法取决于具体的需求和条件,如菌体大小、纯度要求以及设备可用性等。

以下是超滤法收集菌体的一般步骤:①.准备超滤装置:选择合适的超滤装置,通常包括超滤膜、膜支撑和收集容器。确保超滤膜和收集容器是干净和无菌的。.预处理发酵液:根据实际需要,对发酵液进行必要的预处理。例如,可以通过离心等操作去除颗粒物或固体杂质,使液体较为清澈,以利于后续的超滤操作。③.装配超滤装置:将超滤膜安装在超滤装置中,确保膜支撑正确固定并与超滤膜紧密贴合。将超滤装置放置在收集容器上,以便接收通过膜的滤液。④.进行超滤操作:将预处理后的发酵液缓慢倒入超滤装置中,或者通过施加压力或真空力使液体通过超滤膜。超滤操作需要小心缓慢,以防超滤膜破裂或菌体泄漏。⑤.收集菌体:一旦发酵液通过超滤膜,菌体将滞留在膜上,而小分子溶质和液相则通过膜洗脱。当滤液操作完成后,将超滤膜上的菌体收集到干净的容器中。.处理收集的菌体:收集到的菌体可根据需要进行进一步的处理,例如冻干、冷冻保存或进行细胞破碎提取。

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